莧黃正寶藥敏檢測(cè)的相關(guān)問(wèn)題

由于莧黃正寶口服液中含有大量陽(yáng)離子活性成分，如各種黃連原小檗堿與麥康凱瓊脂和營(yíng)養(yǎng)瓊脂的陰離子（硫酸脂多糖、海藻酸）發(fā)生正負(fù)電荷相吸，使得各種黃連原小檗堿（生物堿）失去自由擴(kuò)散的能力，若使用紙片法于半固體瓊脂培養(yǎng)基時(shí)，無(wú)法形成比紙片大的抑菌圈，造成藥物敏感性假陰性（不敏感）實(shí)驗(yàn)誤差。

建議使用液體培養(yǎng)基對(duì)莧黃正寶進(jìn)行敏感性測(cè)試。肉湯稀釋法測(cè)定莧黃正寶大腸桿菌最小抑菌濃度。

一、培養(yǎng)基準(zhǔn)備

水解酪蛋白肉湯（MHB）：稱(chēng)取牛肉粉2.0g，酸水解酪蛋白17.5g，可溶性淀粉1.5g，溶于1L蒸餾水中，121℃高壓滅菌15min，4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

二、實(shí)驗(yàn)耗材

無(wú)菌試管，1ml無(wú)菌移液槍頭。

三、實(shí)驗(yàn)步驟

1、培養(yǎng)基及莧黃正寶稀釋液：取13支無(wú)菌試管，其中三支分別標(biāo)記肉湯對(duì)照，待測(cè)大腸桿菌生長(zhǎng)對(duì)照，質(zhì)控菌生長(zhǎng)對(duì)照。剩余10支分別標(biāo)記，1～10號(hào)。用MHB肉湯稀釋莧黃正寶至待測(cè)最高濃度（五百分之一）。像編號(hào)2～10號(hào)試管中分別加入2mlMH肉湯，然后轉(zhuǎn)向1號(hào)試管中加入4ml稀釋好的莧黃正寶，然后從中去除2ml加入到2號(hào)試管中混勻，取2ml加入到3號(hào)試管中，依次進(jìn)行倍比稀釋至10號(hào)管后棄去2ml。質(zhì)控菌按照同樣操作進(jìn)行。

2、待測(cè)菌和質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)菌準(zhǔn)備：用MH肉湯稀釋菌液為107CFU/ml。

3、菌液接種：從低濃度莧黃正寶試管向高濃度莧黃正寶試管依次加入0.1ml菌液，使菌液終濃度為5×105CFU/ml。加樣時(shí)盡量避免移液槍頭與試管壁接觸。

4、結(jié)果判斷：37℃培養(yǎng)18—24h后，完全抑制待測(cè)菌有肉眼可見(jiàn)生長(zhǎng)的最低莧黃濃度即為莧黃對(duì)待測(cè)菌的MIC。

質(zhì)控菌株：金黃色葡萄球菌ATCC29213；大腸桿菌ATCC25922；腸球菌ATCC29212；銅綠假單細(xì)胞ATCC27853。