豬場消毒效果如何，需要通過洗消程序評估來判斷！
一、洗消程序評估的價值與難點
西小程序評估價值
影響洗消效果的因素
洗消效果評估難點
洗消程序評估難點
偽狂犬病與非瘟病毒比較
3.平行試驗設計
(1)通過檢測篩選陽性污染場，檢測陽性后開展評估實驗;
(2)將20頭份的偽狂犬疫苗毒(107.5TCID50)稀釋為200毫升;
(3)通過刷涂和噴霧制備欄舍內欄桿、墻面和地面的污染區(qū);
(4)靜止2h干燥(每20頭份的疫苗毒可制備10平米的污染區(qū))
(5)洗消前，用拖布或棉布條對豬舍相關區(qū)域進行采樣保存;
(6)用對非瘟有效的消毒劑和洗消程序對豬舍進行全面洗消;
(7)洗消后，用拖布或棉布條對豬舍相關區(qū)域進行采樣保存;
(8)用熒光定量PCR檢測方法，分別檢測偽狂犬疫苗毒和ASFV。
采樣前后比對
平行試驗結果
二、以病毒感染細胞實驗為基礎的評估模型的建立
1、毒株和細胞系選擇：
? PRV分離株(SZ1602)：107.5~8.0TCID50/0.1mL;PK-15 細胞系;
? PRRSV疫苗株(R98)：106.5~7.0TCID50/0.1mL;Marc-145細胞系;
2、實驗基本流程：
病毒與消毒劑混合→感作一定時間→加入針對消毒劑的中和劑→按測定毒價的方法倍比稀釋，接種細胞→觀察細胞病變，與陽性對照比較毒價變化→通過PCR確認
3、結果判定：
病毒滅活率=(消毒前病毒滴度-消毒后病毒滴度)/消毒前病毒滴度*100%以病毒滅活率超過為99.99%以上做為有效的標準。
三、以病毒感染小鼠為基礎的評估模型的建立
1、毒株和小鼠的選擇：
? PRV分離株(SZ1602)：107.5~8.0TCID50/0.1mL; 18~22g SPF昆明雌鼠;
2、攻毒模型的建立：
?、賹?/span>49只小鼠平均分為7組(6組做為攻毒組，剩余為陰性對照)
?、趯?/span>107.6 TCID50/0.1mL的偽狂犬病毒液倍比稀釋為六個梯度
③對其中6個實驗組進行攻毒，對照組注射100uL PBS緩沖液
注：攻毒劑量為100uL，攻毒途徑為腹腔注射
?、苓B續(xù)觀察記錄10天，計算死亡率并通過PCR確診死亡原因
小白鼠實驗數(shù)據(jù)
四、多維度影響因素的評估方法
最大稀釋濃度：
?消毒劑倍比稀釋后，與病毒液感作時間30min;
最小作用時間：
?以適當濃度稀釋消毒劑，分別與病毒液感5min，10min，15min，20min，25min，加中和劑終止反應;
干擾物的影響：
?病毒液先與干擾物混合，再以適當濃度稀釋的消毒劑與病毒液感作30min;
?干擾物選擇：
①植物油(終濃度占比20%);②牛奶(終濃度占比20%) ;③血清(終濃度占比20%);
?還可以針對水質、PH值、溫度等進行評價(待續(xù))
三、對消毒劑評估的階段性結果
細胞模型實驗結果
四、消毒劑應用價值分析和總結
(審核編輯: 豬豬俠)
